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异丙基β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)的介绍

发表时间:2023-12-18
异丙基β-D-硫代半乳糖苷(Isopropyl β-D-1-thiogalactopyranoside,简称IPTG)是一种生物学试剂,常用于诱导大肠杆菌(Escherichia coli)中外源基因的表达。这是一种结构类似于乳糖的分子,但不能被大肠杆菌内的乳糖酶降解。因此,当IPTG存在时,它能够模拟乳糖诱导系统,诱导由外源基因编码的蛋白质的合成。

IPTG的分子式为C9H18O5S,其结构中包含硫代半乳糖和异丙基基团。它是一种白色至淡黄色的结晶性粉末,易溶于水。下面将详细介绍IPTG的一些主要特性和应用。

1. 分子结构:
IPTG的分子结构是一个硫代半乳糖苷,其中包含硫原子和异丙基基团。这个结构使得IPTG不易被大肠杆菌内的乳糖酶降解,从而实现对外源基因表达的可控诱导。

2. 乳糖诱导系统模拟:
在实验室中,研究人员通常使用IPTG模拟乳糖诱导系统。在这个系统中,外源基因的表达是通过乳糖操作子(lac operator)和乳糖启动子(lac promoter)来调控的。当IPTG加入培养基中时,它结合在乳糖操作子上,阻止了乳糖诱导系统中的乳糖酶对乳糖的降解,从而启动外源基因的表达。

3. 诱导表达的控制性:
IPTG的添加量可以调控外源基因的表达水平。通过控制IPTG的浓度,研究人员可以实现对蛋白质表达的精准控制,这对于在实验室条件下研究特定蛋白质的功能和性质非常重要。

4. 常用于蛋白表达系统:
IPTG广泛应用于重组蛋白表达系统中,特别是在质粒表达、蛋白过表达和纯化方面。通过在适当的时间和条件下添加IPTG,研究人员可以实现对目标蛋白质的高效表达。

5. IPTG诱导的机制:
IPTG的添加会导致细菌内的乳糖操作子与IPTG结合形成复合物,阻止乳糖诱导系统的负调控。这使得RNA聚合酶能够结合到乳糖启动子上,启动外源基因的转录和翻译。

6. 实验条件的优化:
在使用IPTG进行诱导表达时,研究人员通常需要优化实验条件,包括IPTG的浓度、诱导时间和温度等因素,以获得最佳的蛋白质表达效果。

总的来说,异丙基β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)在生物学实验室中扮演着重要的角色,为研究人员提供了一种可控制的方法来诱导外源基因的表达,从而推动了基因工程和蛋白质表达领域的发展。
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